点亮开发生物
最近细胞生物和遗传工具的进步使研究人员得以探索前所未有的开发生物结构模型生物,如斑马鱼,Droophilaelegans和Xenopos成为强模型系统,特别适合进行这类量化调查,因为它们快速开发,胚胎和幼年阶段高光清晰度。特别是使用荧光蛋白成像已成为开发生物学不可或缺的工具但由于体积大,这些模型生物对成像构成独特的挑战光表荧光显微镜(LSFM)如何克服这些挑战
ByDr.Dane Maxfield,Bruker
9月1日发布读取时间5min
挑战:样本大小
大型多细胞生物如鼠标喷雾器、Droophila幼虫和斑马鱼胚子对荧光显微镜提供巨大的成像挑战图像质量可能受数大约束因素的影响,包括光散射和光以波长渗透组织,损害深度图像质量视不透明性及组织组成而定,可见光只流进样本约200微米,难以清晰看到样本中距离目标最远的部分大部分高NA目标工作距离远小于胚胎大小的事实也使问题复杂化。举例说,1.4 NA60x目标(大多数组合系统标准选择)工作距离约100微米,无法全机视觉化
解决方案:多视图成像可视觉化采样两侧
挑战:样本加载
样本积聚是这些模型生物大采样的另一复杂度传统显微镜有限后,用户传统上必须手动旋转或操作样本,以便兴趣区最接近覆盖页以获取高质量图像传统显微镜上图像这些样本时,用户通常在两个覆盖页间混合样本,引起感官变形胚子开发后,体积和形状会发生巨变,而这种机械约束可改变或阻塞开发过程更深入地说,像Arabidopsis和Maize等样本自然垂直开发,使得无法用标准组合显微镜重建本地条件
求解:可定制到利息样本的柔和样本
挑战速度
研究开发过程和其他快速生物过程时,研究人员需要能够在与生理相关时间尺度上捕捉图像,以便观察动态过程并实现各种功能成像类型传统点扫描组合技术将用户限制为0.5-2Hz单像素连最新点扫描网点都只能在y15Hz获取相似区域3D快速时间尺度下发生的成像动态生物过程,如成像斑马心跳或Ca函数成像2+瞬态
解决方案:高速体积成像
Challenge: Photobleaching/Phototoxicity
模型生物的一个特殊强度就是通过使用长期延时成像研究插件开发能力研究者可以视觉化3D环境并把这些细胞动态研究转换为生物级然而,对这些大型敏感标本的成像研究历来受擦照和光毒的困扰。常规成像技术,如激光扫描和旋转盘显微镜、焦点上下excite含氟片段并用嵌入焦平面的针孔(或针孔盘)生成光片表示通过获取所有图像 激光波束路径中每个含氟光线都变得兴奋 即便它无助于最终图像雷竞技怎么下载荧光蛋白兴奋时,它有可能进入三重状态和相片分解或与分子O发生反应2并产生自由线程 可能破坏细胞, 导致细胞死亡也称光毒长期延时研究中这些效果特别明显,研究者通常会光破其兴趣蛋白或胚子会因多次高强度光照而停机或死
解决方案:焦点卷中选择含氟光照
脱光比较
低光毒性启用长期成像
技术全解决
光表显微镜学虽然开发生物学上较新技术,但证明对可视化和量化测量开发模型生物过程极有价值柔性采样加固、固有三维光学分解、高时空解析和低光毒分解综合作用使多视光表成为满足你开发生物成像需要的完美解决方案联系我们了解更多新光表解决方案
博士Dane Maxfield,Bruker
