超分辨率显微镜

单分子鱼(smFISH)成像

形象和量化与单分子RNA的敏感性

探索smFISH解决方案

RNA可视化荧光定位和成像技术

RNA转录是生物学的中心法则的关键但很难图像由于其特定要求,荧光标记和纳米大小。力量的Vutara单分子定位显微镜(SMLM)和完全集成的SRX软件使用户能够方便地进行smFISH成像和分析实验。

力量为成功smFISH实验提供了必要的工具包括:

smFISH是什么?

单分子鱼(smFISH)是什么?

单分子荧光原位杂交(smFISH)——也称为smRNA或RNA鱼——是一种尖端技术为研究单个细胞的基因表达。这种技术类似于鱼,它用于可视化DNA的特定基因或部分基因,但在其独特的形象和能力量化不同个体的RNA分子。smFISH超越生命科学领域的应用,包括其中,基因组学、癌症生物学、神经科学等。

关键的优势smFISH

  1. 使可视化和量化的特别标记RNA分子在单分子的决议;和
  2. 支持单细胞基因表达实验通过时间和空间。

P E O P L E L S O年代K:

为什么使用smFISH和鱼?

如果研究问题需要调查和可视化的RNA,而不是DNA, smFISH是大多数优化技术。荧光原位杂交(FISH)运行在同样的原则作为smFISH——互补的荧光探针的杂交目标序列。然而,鱼是针对DNA序列优化,如全部或部分基因的基因。

smFISH用于什么?

smFISH用于什么?

可视化和量化专门标记RNA与单分子决议

执行与Vutara smFISH实验不仅可以量化的RNA,但也使可视化目标在亚细胞RNA的决议。图像的能力打开RNA在细胞内途径研究RNA分布和定位与其他标记或蛋白质。的组合成像和量化smFISH也可以用作读出蛋白质含量的预测。RNA成像的优势与smFISH Vutara从RNA序列数据是独一无二的,它只提供了丰富的RNA定量值。

早期通过正常二倍体肺成纤维细胞标记与非编码RNA MALAT1使用Stellaris®鱼探针end-labeled类星体®670。数据由马可·德Cecco布朗大学。

调查时空基因表达模式

RNA与smFISH成像使单个细胞内基因表达定量和定性实验。在smFISH,科学家可以测量细胞信使rna,进行空间定位和量化等位置的细胞质和细胞核。单一的RNA分子可以追溯到时间分析。

smFISH是如何工作的呢?

smFISH是如何工作的呢?

smFISH, RNA目标通过许多短的杂交和成像,荧光标记的寡核苷酸探针。

如何检测和smFISH mRNA吗

  1. 设计smFISH探针互补的RNA和目标将会加上成像的荧光团
  2. 准备样品成像(可以住或固定)
  3. 杂交smFISH探测目标RNA样本
  4. 收集图片和Vutara VXL在大视场目标模式
  5. 分析你的数据。软件本地化、量化和可视化分子

常见问题解答

常见问题

理解smFISH

smFISH和鱼之间的区别是什么?

荧光原位杂交(FISH)技术用于DNA的可视化、特定基因或部分基因,在细胞内。这种技术通过使用探针杂交工作所需的基因组区域的利益,用荧光染料标记与SMLM是可见的。鱼是一种强大的工具来研究基因组学的问题,因为它支持染色质跟踪应用程序。像鱼、单分子荧光原位杂交(smFISH)是一种技术优化研究单个细胞基因表达,但在本地化的能力不同,量化个人RNA分子。smFISH, RNA目标成像通过许多短的应用时,发出荧光标记的寡核苷酸探针杂交到目标序列。

smFISH RNA如何可视化相比其他RNA可视化技术吗?

smFISH模块的优势是它提供了可视化量化样本内的RNA,与其他技术如RNA序列,只有提供定量RNA丰度值。

执行smFISH

的优势是什么Vutara VXL smFISH实验吗?

使用Vutara smFISH模块的优势是它提供了可视化和定量样品中的RNA,与其他技术如RNA序列,只有提供定量RNA丰度值。

什么软件可以smFISH实验吗?

先进的软件需要分析smFISH SMLM收集的数据。力量SRX软件包含内部分析工具,包括分类和统计,并与外部开源代码兼容。该软件还包括smFISH探针在细胞溶质分布的统计分析和核。

样品准备好smFISH实验怎么样?

力量提供了各种协议SMLM smFISH等方法。你可以找到他们在这里

样品制备的附加议定书和成像探测器可以在这里找到:

Trcek, T。Lionnet, T。、鉴定、H。et al。使用单分子鱼mRNA量化果蝇胚胎。Nat Protoc1326 - 1348 (2017)。https://doi.org/10.1038/nprot.2017.030